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RNA类
circRNA 制备

环状RNA(circRNA)分子是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共价键形成封闭环形结构的RNA分子。与mRNA相比,环状RNA具有在生物体内高稳定性、低免疫原性等优势,可广泛应用在癌症、再生医学、蛋白质替代、传染病和自身免疫疾病等多个领域。 

服务特色
拥有独特的自环化RNA技术与专利,保障circRNA的细胞内稳定性
针对项目需求提供多元化QC工艺,可用于科研实验,助力临床研究
拥有GMP级质粒生产平台,为circRNA制备提供高品质DNA模版
两种circRNA制备策略可选,满足科研和临床级需求,全流程质量管理
技术对比

与线性RNA相比,环状RNA是一种闭环结构,不需要帽子结构或polyA尾。由于没有游离末端,环状RNA能够抵抗RNA外切酶的作用,在细胞内更加稳定。


mRNA环化RNA
功能
标准真核mRNA结构可进行短时间蛋白表达可编码表达蛋白 不编码起调节作用
表达机制
                    5’帽子结构+Kozak翻译起始位点IRES
诱导/靶向能力
有可能,依赖于不同的IRES序列
所需工具酶
加帽酶或帽子类似物核酶,去除线性RNA的酶(如RNaseR)
所需其他序列
5’-UTR,3’-UTR,PolyA尾核酶序列
胞内稳定性
低(一周内),依赖加帽效率和长polyA高(两周左右),无需帽子和polyA结构
编码序列限制
长,取决于体外转录酶的上限随长度增加成环效率下降
产量
体外转录产量高体外转录产量高,但成环底物浓度受限,成环效率低
成本
中等取决于制备方法
表达强度
瞬时表达强度高,下降速度快瞬时表达强度相对弱一些,但持续性好
免疫活性
应用场景
需快速表达大量蛋白的应用需在细胞内稳定存在时间更长的应用
制备原理

宜明生物可提供多种制备circRNA的策略方案,分别基于PIE(内含子-外显子剪接)的环化策略和基于细胞内自环化的的策略:

  • PIE环化策略:PIE(内含子-外显子)环化策略是一种体外合成circRNA的常用体外环化方法。该方法通过设计特定的线性RNA前体,利用内含子与外显子的自剪接作用,在体外条件下实现RNA的环化。

  • 体内自环化RNA:宜明自主研发的通过体外转录产生的线性但可在细胞内自动环化的RNA(acRNA),其5'端带有羟基,3'端带有由核酶或脱氧核酶自我切割形成的2,3-环磷酸盐末端。在转染/递送到细胞后,acRNA可通过人类tRNA剪接机制自动被细胞内源性连接酶环化。

  • 以上两种环化RNA均在内部核糖体进入位点(IRES)元件的驱动下表达编码的蛋白质。


制备流程

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功能验证

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方法对比
PIE体外环化RNA宜明生物的acRNA
简介
体外转录中和转录后内含子核酶剪接成环进入细胞后通过内源性连接酶催化完成环化
表达机制
IRESIRES
诱导/靶向能力
有可能,依赖于IRES序列有可能,依赖于IRES序列和自环化接头元件
所需工具酶
RNaseR无需RNaseR
胞内稳定性
高,无需帽子和polyA结构细胞内成环后高,无需增加额外加帽和加尾工艺
编码序列限制
随长度增加成环效率大幅下降,通常在10K以内随长度增加成环效率下降,通常在10K以内
产量
体外转录产量高,但成环底物浓度受限,成环效率低,副产物不易去除体外转录产量高,自环化最终效率取决于细胞类型,有较多的可筛选性和针对性优化的可能性。
成本
表达强度
瞬时表达较强,有可能达到类似mRNA水平,持续性好瞬时表达较mRNA弱,持续性好
免疫原性
低,但可能残留人工接头序列低,接头为人源化序列,理论上更安全
服务流程
01
需求沟通
02
确定需求
03
签订合同
04
预付款项
05
启动项目
06
成果交付




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