ONT测序是新一代基于纳米孔的单分子实时电信号测序技术，其各平台的测序原理相同。DNA/RNA链在马达蛋白的带领下与镶嵌在生物膜上的纳米孔蛋白结合并解螺旋，在生物膜两侧电压差的作用下，DNA/RNA链以一定的速率通过纳米孔通道蛋白，由于DNA/RNA链上不同碱基化学性质存在差异，所以当单个碱基或DNA/RNA分子通过纳米孔通道时，会引起不同电学信号的变化。通过对这些信号进行检测及对应，即可计算获得相应碱基的类型，完成序列的实时测定。Nanopore的碱基判读是依据其电流信号而产生，因此其判定过程比较复杂。目前Nanopore根据电流的大小及电流大小的变化情况，通过“递归神经网络(Recurrent Neural Network)”的复杂算法对碱基进行判读。

宜明生物针对AAV样品开发了适于ONT测序平台的建库和分析流程，可通过三代测序对AAV制备样品进行单分子水平的高通量质控。

1、提取高质量AAV基因组DNA，退火预处理

2、利用Nanodrop、Qubit和毛细管电泳进行纯度、浓度和完整性质检

3、Nanopore标准建库

4、上机测序和数据分析